Background information and relevant results

Pruimenpokkenvirus (PPV) is de veroorzaker van Sharka, een van de meest verwoestende ziekten van Prunus-soorten, het veroorzaken van belangrijke agronomische en economische verliezen (Cambra et al., 2006). Sinds de eerste beschrijving in Bulgarije (Atanasoff, 1932), het virus heeft zich verspreid naar een groot deel van het Europese continent, rond het Middellandse-Zeegebied en het Midden-Oosten, Zuid- en Noord-Amerika (Chili, Verenigde Staten, Canada, en Argentinië) en Azië (Kazachstan, China en Pakistan) (Capote et al., 2006). Het gebruik van resistente cultivars is de meest effectieve oplossing voor PPV-controle en -beheer. Een transgene PPV-resistente pruim, C5 ('Honing zoet'), is ontwikkeld (Scorza et al., 1994) het benutten van post-transcriptionele genuitschakeling (PTGS), het biedt een zeer efficiënte en effectieve weerstand tegen PPV (Ravelonandro et al., 1997; Scorza et al., 2001). De weerstand is al meer dan duurzaam en stabiel gebleken 10 jaar in veldproeven in de Zwarte Zee, Midden- en West-Europese regio's (Malinowski et al., 2006; Zagrai et al., 2008een). Bovendien, enten van C5-pruim met verschillende andere virussen in het veld en in de kas hebben de stabiliteit van de gemanipuleerde resistentie tegen PPV gedurende drie rustperioden niet beïnvloed (Zagrai et al., 2008b).

De transgene C5 ('Honing zoet') pruim heeft geen invloed op de samenstelling van viruspopulaties en geen effect op niet-doelorganismen gedurende een langere periode (Fuchs et al., 2007; Capote et al., 2008; Zagrai et al., 2008c). De verplaatsing van ‘HoneySweet’ stuifmeel is beperkt. Werken met ‘HoneySweet’ heeft nieuwe inzichten opgeleverd in het gebruik van PPV-resistente transgene pruimen en heeft aangetoond dat deze pruimen geen negatieve milieueffecten hebben. Deze studies wijzen op de voordelen van deze technologie om de verspreiding van PPV te beheersen, om de productie van pruimen aanzienlijk te verbeteren in gebieden met PPV-infectie, en om de genetische diversiteit van pruimen op deze gebieden te helpen behouden.

Stage of Development

Om verdere veldproeven uit te voeren met C5-transgene pruimen en om meer informatie te verkrijgen over de agronomische en fenotype-prestaties en compatibiliteit van dit evenement onder PPV endemisch gebied en geoklimatologische omstandigheden van Roemenië, er moet een nieuw aanvraagdossier worden ingediend.

Redenen voor Blok / Delay

In November 2005 overeenkomstig het Roemeens recht is een aanvraagdossier ingediend bij het Ministerie van Milieu 214/2002, voor het verlenen van een toelating voor het uitvoeren van veldproeven met C5. In februari 2006 de aanvraag werd afgewezen op grond van het feit dat er intussen een nieuwe verordening in behandeling was. Volgens de nieuwe verordening, veldproeven waren verboden binnen 15 km van beschermde natuurgebieden. Het aanvraagdossier werd afgewezen, hoewel er geen verband kon worden gelegd tussen pruimen en bestaande beschermde gebieden in 10, 11 en 12 km van onze voorgestelde veldlocatie. Inmiddels een geschikte locatie zonder beschermde gebieden dichterbij dan 15 km werd geïdentificeerd en in maart werd een nieuw aanvraagdossier ingediend 2006. In juli 2006 de bovengenoemde verordening werd gewijzigd en de vorige limiet van 15 km van beschermd natuurgebied werd gewijzigd. in augustus 2006 we hebben de toestemming ontvangen van de vijf instanties die bevoegd zijn om ons aanvraagdossier als volgt te beoordelen:

  • Bioveiligheidscommissie - gunstige toestemming
  • Ministerie van Landbouw - ongunstige toestemming. De reden was de aanwezigheid van npt II-antibioticumgenmarker volgens art. Nee. 4 uit Richtlijn 2001/18 / EG
  • Nationaal sanitair, Veterinaire en voedselveiligheidsautoriteit - gunstige toestemming
  • Nationale autoriteit voor consumentenbescherming - was van mening dat het verzoek niet onder haar bevoegdheid valt.

Algemene reactie: omdat het Ministerie van Landbouw als begunstigde van deze studie ongunstige toestemming gaf, het kennisgevingsverzoek is afgewezen.

Rekening houdend met het feit dat de ongunstige toestemming was gebaseerd op een verkeerde interpretatie van kunst. Nee. 4 Richtlijn 2001/18 / EG die het gebruik van antibioticaresistentiegenen voor onderzoeksdoeleinden uitsluit, maar pas beginnen 2008, we hebben een bezwaarschrift ingediend, inclusief het advies van de Europese Autoriteit voor voedselveiligheid (EFSA-Q-2003-109, geadopteerd: 02/04/2004) volgens welke het npt II-gen wordt beschouwd zonder nadelige effecten op de menselijke gezondheid en het milieu en een veilige gebruiksgeschiedenis heeft van meer dan 13 jaar.
Het ministerie van Landbouw heeft zijn standpunt heroverwogen naar aanleiding van ons beroep en heeft in november een gunstig akkoord gezonden aan het ministerie van Milieu 2006. Destijds kregen we van alle vijf toezichthoudende instanties gunstige toestemmingen, maar onverwacht, het Ministerie van Milieu keurde het niet goed om een ​​procedurefout van de Roemeense regelgevingsprocedure in te roepen. Precies, het Ministerie van Milieu heeft aangevoerd dat de Verordening nr 49/2000 wel een mogelijke heroverweging van een reeds verleende toestemming. Dit is tegenstrijdig omdat hetzelfde ministerie aanvankelijk onze oproep accepteerde en doorstuurde naar het Ministerie van Landbouw. In deze situatie, het Ministerie van Milieu stelde voor om een ​​nieuwe aanvraag in te dienen. In februari 2007 er is een nieuwe aanvraag ingediend. In mei 2007 alle stappen van de evaluatieprocedure zijn afgerond, maar de vergunning is vertraagd. In juli 2007, het ministerie van Milieu heeft een aanvullend openbaar regionaal debat gepland. De resultaten toonden unanieme steun van geïnteresseerde factoren.

Hoewel de evaluatieprocedure was afgerond en alle benodigde documenten ter goedkeuring waren voorgelegd, het Ministerie van Milieu vertraagd, zonder rechtvaardiging, het verlenen van de vergunning. Eindelijk, de autorisatie nr. 4/9 November 2007 voor een nieuwe veldproef met C5 (tot 2011) werd verleend, maar legde verdere beperkingen op, waardoor de experimentele proef bijna onmogelijk uit te voeren was. Een van de beperkingen verwijst naar het feit dat de bomen tijdens de vegetatieve periode een beschermende laag moeten hebben. De reden voor de vereiste is niet duidelijk, aangezien veldproeven met succes en veilig zijn uitgevoerd in Spanje, Polen en Roemenië sinds 1996 en de ecologische veiligheidsaspecten van deze aanplant zijn gepubliceerd in peer-reviewed tijdschriften en gepresenteerd in het aanvraagdossier. Er moet ook worden opgemerkt dat de totale oppervlakte van de "geautoriseerde" proef slechts is 400 m2 die voldoende is voor slechts ongeveer 15 planten van C5 en 15 planten van de conventionele cultivar.

Om de beperkingen redelijker te maken, we hebben een verzoekschrift ingediend bij het Nationaal Agentschap voor Milieubescherming als Bevoegde Autoriteit en argumenten gepresenteerd met referentiegegevens en literatuur. De reactie van de bevoegde autoriteit was dat we een nieuw aanvraagdossier moesten indienen. Dit brengt extra kosten met zich mee en is tijdrovend.

Foregone Benefits

Sharka heeft ernstige agronomische en politieke gevolgen als gevolg van enorme economische verliezen. Maatregelen als quarantaine en uitroeiing van besmette bomen zijn onvoldoende gebleken om de continue verspreiding van PPV te voorkomen, en tegenwoordig oefenen veel landen samen met de ziekte uit, ondanks zware verliezen in sommige gevallen. Door de snelle verspreiding van PPV door bladluizen en de aanwezigheid van veel potentiële gastheren, De ziekte van Sharka is moeilijk uit te roeien als het eenmaal in een gebied is ingeburgerd. Therefore, het gebruik van resistente cultivars is de belangrijkste strategie om PPV te bestrijden. Het gebruik van natuurlijke resistentiebronnen is belangrijk voor de ontwikkeling van nieuwe variëteiten, maar het is moeilijk en langdurig om dergelijke resistentie op te nemen in steenfruitvariëteiten door middel van conventionele veredeling.

De resistentie van C5-pruim is erfelijk en wordt overgedragen via zaad en kan gemakkelijk worden geselecteerd en daarom kan ‘HoneySweet’ als ouder worden gebruikt in kweekprogramma's om snel nieuwe resistente soorten te selecteren (Scorza et al., 1998; Ravelonandro et al., 2002). Bovendien, directe transformatie van momenteel populaire of traditionele cultivars is momenteel een optie bij sommige Prunus-soorten.

Pictures

Vruchten van C 5 transgene kloon (Honing zoet) resistent tegen PPV

Cost of Research

to be completed

References – achtergrond van casestudy

Zagrai I., Ravelonandro M., Zest R., Mnoiu N., Zagrai L., 2008een. Vrijgave van transgene pruimen in Roemenië. Bulletin van de Universiteit voor Landbouwwetenschappen en Diergeneeskunde Cluj-Napoca, Dierwetenschappen en biotechnologie. 65:358-365. ISSN 1843-5262.

Zagrai I., Hood N., Ravelonandro M., Kamer M., Zagrai L., Zest R., 2008b- Pruimpokkenvirus-uitschakeling van C5-transgene pruimen is stabiel onder inoculatie met heterologe virussen. Journal of Plant Pathology, 90:63-71.

Zagrai I., Zagrai L., Ravelonandro M., Gaborese I., Pamfil D., Ferencz B., Popescu O., Zest R., Kapotjas, N. 2008c. Milieu-effectbeoordeling van transgene pruimen op de diversiteit van populatie van pruimpokkenvirus. Acta Horticultuarae 781: 309-318.

Extra referenties

Atanassov D., 1932. Pruimenpokken. Een nieuwe virusziekte. Ann Univ. Sofia Faculteit Ag. Silv. 11: 49-69.

Kamer M., Hood N., Myrta A., Llácer G., 2006. Pruimenpokkenvirus en geschatte kosten in verband met de ziekte van Sharka. Bulletin OEPP / EPPO Bulletin 36:202-204.

Hood N., Kamer M., Llácer G., Petter F., Platts L.G., Roy A.S., Smith I.M., 2006. Een overzicht van het Pruimpokkenvirus / Een overzicht van het Pruimpokkenvirus. In: Stier. OEPP / EPPO Bull. 36 (2) : 201-349.

Hood N., Perez-Panades J., Monzo C., Carbonell E., Urbaneja A., Zest R., Ravelonandro M., Kamer M., 2008. Beoordeling van de diversiteit en dynamiek van het Pruimpokkenvirus en bladluispopulaties in transgene Europese pruimen onder mediterrane omstandigheden. Transgeen onderzoek 17:367-377

Fuchs M., Kamer M., Hood N., Jelkmann W., Kundu J., Laval V., Martelli G.P., Minafra A., Petrovic N., Pfieffer P., Pump-Nocak M., Ravelonandro M., Sldarelli P., Stussi-Garaud C., Vigne E., Zagrai I., 2007. Veiligheidsbeoordeling van transgene pruimen en wijnstokken die genen voor virale vacht-eiwitten tot expressie brengen: nieuwe inzichten in de werkelijke milieu-impact van vaste planten die zijn ontwikkeld voor virusresistentie. Journal of Plant Pathology 89: 5-12.

Malinowski T., Kamer M., Hood N., Zawadzka B., Gorris M.T., Zest R., Ravelonandro M., 2006. Veldproeven van pruimklonen getransformeerd met het Plum pox-viruscoatingeiwit (PPV-CP) gen. Plantenziekte 90:1012-1018.

Ravelonandro M., Zest R., Bachelor J.C., Labonne G., Levy L., Damsteegt V., Callahan A.M., Dunez J., 1997. Weerstand van transgeen Prunus domestica tegen de infectie met het pruimpokkenvirus. Plantenziekte, 81: 1231-1235

Ravelonandro M., Briard P., Monsion M., Zest R., 2002. Stabiele overdracht van het pruimenpokkenvirus (PPV) capside-transgen voor zaailingen van twee Franse cultivars ‘Prunier d’Ente 303’ en ‘Quetsche 2906’, en voorlopige resultaten van PPV-challenge-assays. Acta Hort. 577:91-96.

Zest R., Ravelonandro M., Callahan A.M., Hart J.M., Fuchs M., Dunez J., Gonsalves D., 1994. Transgene pruimen (Prunus domestica) uitdrukken de pruimenpokken virus vacht eiwit gen. Plant Cell Repts. 14:18-22.

Zest R., Callahan A., Levy L., Damsteegt V., Webb K., Ravelonandro M., 2001. Post-transcriptionele genuitschakeling pruimenpokkenvirus resistente transgene Europese pruim met de pruimenpokken potyvirus manteleiwitgen. Transgeen onderzoek 10: 201-209.

Zest R., Callahan A., Levy L., Damsteegt V., Ravelonandro M., 1998. Het overbrengen van potyvirus-vachteiwitgenen door hybridisatie van transgene planten om pruimpokkenvirusresistente pruimen te produceren (Prunus domestica L.). Acta Horticulturae 472:421-425.

Principal Investigator

Zagrai I., Research-Development Station voor Bistrita Fruit Growing, Laboratorium voor fokkerij en virologie., Dumitree Nou straat, Nee 3, Bistrita, Roemenië. E-mail: izagrai@yahoo.com