מידע רקע ותוצאות רלוונטיות

וירוס אבעבועות רוח (PPV) הוא הסוכן הסיבתי של שרקה, אחת המחלות ההרסניות ביותר של מיני פרונוס, גורם להפסדים אגרונומיים וכלכליים חשובים (Chamber et al., 2006). מאז התיאור הראשון שלו בבולגריה (אטנאסוף, 1932), הנגיף התפשט לחלק גדול מיבשת אירופה, סביב אגן הים התיכון והמזרח התיכון, דרום וצפון אמריקה (צ'ילה, ארצות הברית, קנדה, וארגנטינה) ואסיה (קזחסטן, סין ופקיסטן) (קפוטה וחב'., 2006). השימוש בזנים עמידים מייצג את הפתרון היעיל ביותר לבקרה וניהול PPV. שזיף טרנסגני עמיד בפני PPV, C5 ("מתוקה דבש"), פותחה (Scorza et al., 1994) ניצול השתקת גנים לאחר שעתוק (PTGS), מתן עמידות יעילה ויעילה ביותר נגד PPV (Ravelonandro et al., 1997; Scorza et al., 2001). ההתנגדות הוכיחה עמידה ויציבה ליותר מ 10 שנים בניסויי שדה בים השחור, אזורים תיכוניים ומערב אירופה (לפי מלינובסקי ואח'., 2006; זגראי וחב'., 2008a). בנוסף, חיסון השתל של שזיף C5 עם מספר וירוסים אחרים בשדה ובחממה לא השפיעו על יציבות העמידות המהונדסת ל-PPV במשך שלוש תקופות תרדמה (זגראי וחב'., 2008ב).

ה-C5 הטרנסגני ("מתוקה דבש") שזיף לא הראה השפעה על הרכב אוכלוסיות הנגיפים וללא השפעה על אורגניזמים שאינם מטרה על פני תקופה ממושכת (פוקס וחב'., 2007; קפוטה וחב'., 2008; זגראי וחב'., 2008ג). תנועה של אבקה 'דבש מתוק' מוגבלת. העבודה עם 'HoneySweet' סיפקה תובנות חדשות לגבי השימוש בשזיפים מהונדסים עמידים ל-PPV והדגימה את היעדר השפעות סביבתיות שליליות של שזיפים אלה. מחקרים אלו מצביעים על היתרונות של טכנולוגיה זו לשלוט בהתפשטות ה-PPV, כדי לשפר משמעותית את ייצור השזיפים באזורים של זיהום PPV, וכדי לסייע בשמירה על המגוון הגנטי של השזיף באזורים אלו.

שלב של פיתוח

על מנת לבצע ניסויים נוספים בשטח עם שזיף מהונדס C5 וכדי לקבל מידע נוסף הנוגע לביצועים האגרונומיים והפנוטיפיים ולתאימות של אירוע זה תחת אזור אנדמי PPV ותנאים גיאו-אקלימיים של רומניה, יש להגיש תיק בקשה חדש.

סיבות לבלוק / עיכוב

בנובמבר 2005 למשרד לאיכות הסביבה הוגש תיק בקשה לפי החוק הרומני 214/2002, למתן אישור לביצוע ניסויי שדה עם C5. בפברואר 2006 הבקשה נדחתה על רקע שבינתיים תלויה ועומדת תקנה חדשה לאימוץ. בהתאם לתקנה החדשה, ניסויי שדה נאסרו בטווח של 15 ק"מ מאזורים מוגנים טבעיים. תיק הבקשה נדחה, למרות שלא ניתן היה ליצור קשר בין שזיף לאזורים מוגנים קיימים ב 10, 11 ו - 12 ק"מ ממיקום אתר השדה המוצע שלנו. בינתיים מיקום מתאים ללא אזורים מוגנים קרובים יותר מ 15 ק"מ זוהה ותיק בקשה חדש הוגש במרץ 2006. ביולי 2006 הרגולציה המוזכרת לעיל שונתה והמגבלה הקודמת של 15 ק"מ מאזור מוגן טבעי תוקן. בחודש אוגוסט 2006 קיבלנו את ההסכמות מחמשת הגופים המוסמכים להעריך את תיק הבקשה שלנו באופן הבא:

  • עמלת בטיחות ביולוגית - הסכמה חיובית
  • משרד החקלאות – הסכמה לא חיובית. הסיבה הייתה נוכחות של סמן גן אנטיביוטי npt II על פי אמנות. לא. 4 מתוך הוראה 2001/18/EC
  • National Sanitary, Veterinary and Food Safety Authority – favorable consent
  • National Authority for Consumer Protection – considered that the request is outside of its competence.

General response: because the Ministry of Agriculture as beneficiary of this study gave unfavorable consent, the notification request was rejected.

Taking into account that the unfavorable consent was based on a wrong interpretation of art. לא. 4 Directive 2001/18/EC that does exclude the use of antibiotic resistance genes for research purposes, but only beginning with 2008, we issued an appeal including the Opinion of European Food Safety Authority (EFSA-Q-2003-109, adopted: 02/04/2004) according to which the npt II gene is considered without adverse effects on human health and the environment and has a safe history of use of more than 13 שנים.
משרד החקלאות שקל מחדש את עמדתו בעקבות פנייתנו והעביר הסכמה חיובית למשרד לאיכות הסביבה בנובמבר 2006. באותו זמן קיבלנו הסכמות חיוביות מכל חמשת הגופים הרגולטוריים אך באופן בלתי צפוי, המשרד לאיכות הסביבה לא אישר להפעיל טעות פרוצדורלית של הנוהל הרגולטורי הרומני. בְּדִיוּק, המשרד לאיכות הסביבה טען כי פקודה מס 49/2000 אכן קובעת בדיקה אפשרית מחדש של הסכמה שכבר ניתנה. זה סותר כי אותו משרד קיבל תחילה את הערעור שלנו והעביר אותו למשרד החקלאות. במצב זה, המשרד לאיכות הסביבה הציע להגיש בקשה חדשה. בפברואר 2007 הוגשה בקשה חדשה. במאי 2007 כל שלבי הליך ההערכה הסתיימו אך ההיתר התעכב. ביולי 2007, המשרד לאיכות הסביבה תכנן דיון אזורי ציבורי נוסף. התוצאות הראו תמיכה פה אחד מצד גורמים מעוניינים.

אמנם הליך ההערכה הסתיים והוצגו כל המסמכים הדרושים לאישור, המשרד לאיכות הסביבה מתעכב, ללא הצדקה, מתן ההיתר. לבסוף, האישור מס. 4/9 נובמבר 2007 לניסוי שדה חדש עם C5 (עד 2011) ניתן אך הוטלו הגבלות נוספות שהפכו את הניסוי הניסיוני לכמעט בלתי אפשרי לביצוע. אחת ההגבלות מתייחסת לכך שעל העצים להיות כיסוי מגן במהלך תקופת הצומח. הרציונל לדרישה אינו ברור שכן ניסויי שדה בוצעו בהצלחה ובבטחה בספרד, מאז פולין ורומניה 1996 והיבטי הבטיחות האקולוגיים של נטיעות אלה פורסמו בכתבי עת שנבדקו עמיתים והוצגו בקובץ הבקשה. כמו כן, יש לציין כי השטח הכולל של המשפט ה"מורשה" הוא בלבד 400 מ"ר שמספיק רק בקירוב 15 צמחים של C5 ו 15 צמחים מהזן הקונבנציונלי.

על מנת להפוך את ההגבלות להגיוניות יותר, הגשנו עתירה לסוכנות הלאומית להגנת הסביבה כרשות מוסמכת והצגנו טיעונים באמצעות נתוני עזר וספרות. תגובת הרשות המוסמכת הייתה שעלינו להגיש תיק בקשה חדש. הדבר כרוך בעלויות נוספות וגוזל זמן רב.

יתרונות ידועים מראש

לשרקה השלכות אגרונומיות ופוליטיות חמורות עקב הפסדים כלכליים אדירים. אמצעים כמו הסגר והדברת עצים נגועים הוכחו כלא מספיקים כדי למנוע התפשטות מתמשכת של PPV, וכיום מדינות רבות נוהגות בדו קיום עם המחלה למרות הפסדים כבדים במקרים מסוימים. עקב התפשטות מהירה של PPV על ידי כנימות ונוכחות של מארחים פוטנציאליים רבים, קשה להדביר את מחלת השרקה לאחר שהתבססה באזור. לָכֵן, השימוש בזנים עמידים מייצג את האסטרטגיה החשובה ביותר לשליטה ב-PPV. ניצול מקורות עמידות טבעיים חשוב לפיתוח זנים חדשים אך קשה וארוך לשלב עמידות כזו בזני פירות האבן באמצעות גידול קונבנציונלי.

העמידות של שזיף C5 היא תורשתית ומועברת דרך זרע וניתנת לבחירה בקלות ולכן ניתן להשתמש ב-'HoneySweet' כהורה בתוכניות רבייה לבחירה מהירה של סוגים עמידים חדשים (Scorza et al., 1998; Ravelonandro et al., 2002). בנוסף, טרנספורמציה ישירה של זנים פופולריים או מסורתיים כיום היא אופציה בכמה מיני Prunus.

תמונות

פירות של C 5 שיבוט מהונדס (מתוק מתוק) עמיד בפני PPV

עלות של מחקר

להסתיים

אזכור – רקע למחקר מקרה

זגראי א., רבוננדרו מ., סקורזה ר., מנויו נ., זגראי ל., 2008a. שחרור שדה של שזיפים מהונדסים ברומניה. עלון של האוניברסיטה למדעי החקלאות ורפואה וטרינרית קלוז'-נאפוקה, מדעי בעלי חיים וביוטכנולוגיות. 65:358-365. ISSN 1843-5262.

זגראי א., הוד נ., רבוננדרו מ., לשכת מ., זגראי ל., סקורזה ר., 2008ב- השתקת וירוס אבעבועות השזיף של שזיפים מהונדסים C5 יציב תחת חיסון אתגר עם וירוסים הטרוגים. כתב עת לפתולוגיה של צמחים, 90:63-71.

זגראי א., זגראי ל., רבוננדרו מ., Gaboreanu I., פמפיל ד., פרנץ ב., פופסקו או., סקורזה ר., קפוטה, נ. 2008ג. הערכת השפעה סביבתית של שזיפים מהונדסים על המגוון של אוכלוסיות נגיף אבעבועות השזיף. כתב עת לגננות 781: 309-318.

אזכור נוסף

אטנאסוב ד., 1932. אבעבועות שזיף. מחלת וירוס חדשה. אן אוניב. סופיה פקולטה אג. יַעַר. 11: 49-69.

לשכת מ., הוד נ., מירטה א., לאסר ג., 2006. וירוס אבעבועות השזיף ועלויות משוערות הקשורות למחלת השרקה. עלון OEPP/EPPO עלון 36:202-204.

הוד נ., לשכת מ., לאסר ג., פטר פ., פלאטס ל.ג., רוי א.ש., סמית' I.M., 2006. סקירה של וירוס אבעבועות השזיף/Une revue du Plum pox virus. בתוך: שׁוֹר. OEPP/EPPO בול. 36 (2) : 201-349.

הוד נ., פרז-פנדס ג'יי., מונזו סי., Carbonell E., אורבניה א., סקורזה ר., רבוננדרו מ., לשכת מ., 2008. הערכת המגוון והדינמיקה של אוכלוסיות נגיף אבעבועות השזיף וכנימות בשזיפים אירופיים מהונדסים בתנאים ים תיכוניים. מחקר טרנסגני 17:367-377

פוקס מ., לשכת מ., הוד נ., ילקמן וו., קונדו ג'יי., לאבל V., מרטלי ג.פ., מינפרה א., פטרוביץ' נ., פיפר פ., Pump-Nocak M., רבוננדרו מ., סלדרלי פ., שטוסי-גאראו סי., כרמים E., זגראי א., 2007. הערכת בטיחות של שזיפים טרנסגניים וגפנים המבטאים גנים של חלבון מעיל ויראלי: תובנות חדשות לגבי ההשפעה הסביבתית האמיתית של צמחים רב-שנתיים שהונדסו לעמידות לווירוסים. כתב עת לפתולוגיה של צמחים 89: 5-12.

מלינובסקי טי., לשכת מ., הוד נ., זוואדזקה ב., גוריס מ.טי., סקורזה ר., רבוננדרו מ., 2006. ניסויי שדה של שיבוטי שזיפים שעברו טרנספורמציה עם חלבון המעיל של וירוס אבעבועות השזיף (PPV-CP) גֵן. מחלת צמחים 90:1012-1018.

רבוננדרו מ., סקורזה ר., תואר ראשון J.C., לבון ג'י., לוי ל., Damsteeg V., קאלהאן א.מ., Dunez J., 1997. עמידות של טרנסגני Prunus domestica לזיהום בנגיף אבעבועות רוח. מחלת צמחים, 81: 1231-1235

רבוננדרו מ., בריארד פ., מונסיון מ., סקורזה ר., 2002. העברה יציבה של נגיף אבעבועות השזיף (PPV) קפסיד טרנסגן לשתילים של שני זנים צרפתיים 'Prunier d'Ente 303' ו'Quetsche 2906', ותוצאות ראשוניות של מבחני אתגר PPV. מעשה הורט. 577:91-96.

סקורזה ר., רבוננדרו מ., קאלהאן א.מ., לב J.M., פוקס מ., Dunez J., גונסלבס ד., 1994. שזיפים מהונדסים (Prunus domestica) להביע את אבעבועות שזיף נגיף גן חלבון המעיל. נציגי תא צמחים. 14:18-22.

סקורזה ר., קלהאן א., לוי ל., Damsteeg V., ווב ק., רבוננדרו מ., 2001. השתקת גנים לאחר שעתוק פנימה וירוס אבעבועות רוח שזיף אירופי מהונדס עמיד המכיל את אבעבועות שזיף גן חלבון מעיל פוטוירוס. מחקר טרנסגני 10: 201-209.

סקורזה ר., קלהאן א., לוי ל., Damsteeg V., רבוננדרו מ., 1998. העברת גנים של חלבון מעיל פוטי וירוס באמצעות הכלאה של צמחים מהונדסים לייצור שזיפים עמידים לווירוס אבעבועות רוח (Prunus domestica ל.). כתב עת לגננות 472:421-425.

חוקר ראשי

זגראי א., תחנת המחקר-פיתוח לתרבות פירות ביסטריטה, מעבדת רבייה וירולוגיה., רחוב Drumul Dumitrei Nou, לא 3, ביסטריצה, רומניה. אימייל: izagrai@yahoo.com