Baggrundsinformation og relevante resultater

Blommekoppevirus (PPV) er årsagsagenten til Sharka, en af ​​de mest ødelæggende sygdomme hos Prunus arter, forårsager betydelige agronomiske og økonomiske tab (Chamber et al., 2006). Siden dens første beskrivelse i Bulgarien (Atanasoff, 1932), virussen har spredt sig til en stor del af det europæiske kontinent, omkring Middelhavsområdet og Mellemøsten, Syd- og Nordamerika (Chile, USA, Canada, og Argentina) og Asien (Kasakhstan, Kina og Pakistan) (Capote et al., 2006). Brugen af ​​resistente sorter repræsenterer den mest effektive løsning til PPV-kontrol og -styring. En transgen PPV-resistent blomme, C5 ('HoneySweet'), er blevet udviklet (Scorza et al., 1994) udnyttelse af post-transkriptionel gendæmpning (PTGS), giver en meget effektiv og effektiv modstand mod PPV (Ravelonandro et al., 1997; Scorza et al., 2001). Modstanden har vist sig holdbar og stabil i mere end 10 år i feltforsøg i Sortehavet, Mellem- og vesteuropæiske regioner (Malinowski et al., 2006; Zagrai et al., 2008en). Desuden, podning af C5-blomme med flere andre vira i marken og i drivhuset har ikke påvirket stabiliteten af ​​den manipulerede resistens over for PPV over tre hvileperioder (Zagrai et al., 2008b).

Den transgene C5 ('HoneySweet') blomme har ikke vist nogen indvirkning på sammensætningen af ​​viruspopulationer og ingen indvirkning på ikke-målorganismer over en længere periode (Fuchs et al., 2007; Capote et al., 2008; Zagrai et al., 2008C). Bevægelse af 'HoneySweet' pollen er begrænset. Arbejdet med 'HoneySweet' har givet ny indsigt i brugen af ​​PPV-resistente transgene blommer og demonstreret manglen på negative miljøpåvirkninger af disse blommer. Disse undersøgelser viser fordelene ved denne teknologi til at kontrollere spredningen af ​​PPV, at forbedre blommeproduktionen i områder med PPV-infektion markant, og at hjælpe med at bevare blommens genetiske mangfoldighed i disse områder.

Udviklingstrin

For at udføre yderligere feltforsøg med C5 transgene blommer og for at få mere information om den agronomiske og fænotype ydeevne og kompatibilitet af denne begivenhed under PPV endemisk område og geo-klimatiske forhold i Rumænien, der skal indsendes en ny ansøgning.

Årsager til blok / Delay

I november 2005 en ansøgning blev indsendt til miljøministeriet i henhold til rumænsk lov 214/2002, for udstedelse af tilladelse til at udføre feltforsøg med C5. I februar 2006 Ansøgningen blev afvist på baggrund af, at en ny forordning i mellemtiden ventede at blive vedtaget. Ifølge den nye forordning, feltforsøg var forbudt inden for 15 km fra naturbeskyttede områder. Ansøgningsmappen blev afvist, selvom der ikke kunne trækkes forbindelse mellem blomme og eksisterende fredede områder kl 10, 11 og 12 km fra vores foreslåede markpladsplacering. I mellemtiden et passende sted uden beskyttede områder tættere på end 15 km blev identificeret og en ny ansøgning blev indsendt i marts 2006. I juli 2006 ovennævnte regulering blev ændret og den tidligere grænse på 15 km fra naturbeskyttet område blev ændret. I august 2006 vi modtog samtykkerne fra de fem organer, der er bemyndiget til at vurdere vores ansøgningsdossier som følger:

  • Biosikkerhedskommission – gunstigt samtykke
  • Landbrugsministeriet – ugunstigt samtykke. Årsagen var tilstedeværelsen af ​​npt II antibiotisk genmarkør ifølge art. ingen. 4 fra direktiv 2001/18/EF
  • National sanitet, Veterinary and Food Safety Authority – favorable consent
  • National Authority for Consumer Protection – considered that the request is outside of its competence.

General response: because the Ministry of Agriculture as beneficiary of this study gave unfavorable consent, the notification request was rejected.

Taking into account that the unfavorable consent was based on a wrong interpretation of art. ingen. 4 Directive 2001/18/EC that does exclude the use of antibiotic resistance genes for research purposes, but only beginning with 2008, we issued an appeal including the Opinion of European Food Safety Authority (EFSA-Q-2003-109, adopted: 02/04/2004) according to which the npt II gene is considered without adverse effects on human health and the environment and has a safe history of use of more than 13 år.
Landbrugsministeriet genovervejede sin holdning efter vores appel og fremsendte et positivt samtykke til Miljøministeriet i november 2006. På det tidspunkt fik vi gunstige samtykker fra alle fem tilsynsorganer, men uventet, Miljøministeriet godkendte ikke at påberåbe sig en procedurefejl i den rumænske forskriftsprocedure. Helt præcist, Miljøministeriet har påberåbt sig, at bekendtgørelse nr 49/2000 fastsætter en eventuel genovervejelse af et allerede udstedt samtykke. Dette er selvmodsigende, fordi det samme ministerium oprindeligt accepterede vores appel og videresendte den til Landbrugsministeriet. I denne situation, Miljøministeriet foreslog at indsende en ny ansøgning. I februar 2007 der blev indsendt en ny ansøgning. I maj 2007 alle trin i evalueringsproceduren blev afsluttet, men tilladelsen blev forsinket. I juli 2007, Miljøministeriet planlagde en yderligere offentlig regional debat. Resultaterne viste enstemmig opbakning fra interesserede faktorer.

Selvom evalueringsproceduren var afsluttet, og alle nødvendige dokumenter til godkendelse blev fremlagt, Miljøministeriet forsinket, uden begrundelse, meddelelsen af ​​tilladelsen. Endelig, autorisationsnr. 4/9 November 2007 til et nyt feltforsøg med C5 (indtil 2011) blev givet, men pålagt yderligere begrænsninger, der gjorde forsøgsforsøget næsten umuligt at gennemføre. En af begrænsningerne henviser til, at træerne skal have et beskyttende dæksel i den vegetative periode. Begrundelsen for kravet er ikke klar, da feltforsøg er blevet udført med succes og sikkert i Spanien, Polen og Rumænien siden 1996 og de økologiske sikkerhedsaspekter af disse beplantninger er blevet offentliggjort i peer-reviewede tidsskrifter og præsenteret i ansøgningsfilen. Det skal også bemærkes, at det samlede areal af det "autoriserede" forsøg kun er 400 m2 hvilket er tilstrækkeligt til kun ca 15 planter af C5 og 15 planter af den konventionelle kultivar.

For at gøre restriktionerne mere rimelige, vi indgav en andragende til National Agency for Environmental Protection som kompetent myndighed og fremlagde argumenter ved hjælp af referencedata og litteratur. Den kompetente myndigheds svar var, at vi skulle indsende en ny ansøgningsfil. Dette medfører ekstra omkostninger og er tidskrævende.

Eftergivne Fordele

Sharka har alvorlige agronomiske og politiske konsekvenser på grund af enorme økonomiske tab. Foranstaltninger som karantæne og udryddelse af inficerede træer har vist sig at være utilstrækkelige til at forhindre den fortsatte spredning af PPV, og i dag praktiserer mange lande sameksistens med sygdommen på trods af store tab i nogle tilfælde. På grund af den hurtige spredning af PPV af bladlus og tilstedeværelsen af ​​mange potentielle værter, Sharka sygdom er svær at udrydde, når den først er etableret i et område. Derfor, brugen af ​​resistente sorter repræsenterer den vigtigste strategi til at kontrollere PPV. Udnyttelsen af ​​naturlige resistenskilder er vigtig for udviklingen af ​​nye sorter, men det er vanskeligt og langvarigt at indarbejde en sådan resistens i stenfrugtsorter gennem konventionel forædling.

Resistensen af ​​C5 blomme er arvelig og overføres gennem frø og kan let udvælges, og derfor kan 'HoneySweet' bruges som forælder i avlsprogrammer til hurtigt at udvælge nye resistente typer (Scorza et al., 1998; Ravelonandro et al., 2002). Desuden, direkte transformation af aktuelt populære eller traditionelle kultivarer er i øjeblikket en mulighed i nogle Prunus-arter.

Billeder

Frugter af C 5 transgen klon (Honning sød) modstandsdygtig over for PPV

Udgifter til forskning

udfyldes

Referencer – baggrund for casestudie

Zagrai I., Ravelonandro M., Scorza R., Mnoiu N., Zagrai L., 2008en. Markudsætning af transgene blommer i Rumænien. Bulletin for University of Agricultural Sciences and Veterinary Medicine Cluj-Napoca, Husdyrvidenskab og bioteknologi. 65:358-365. ISSN 1843-5262.

Zagrai I., Hætte N., Ravelonandro M., Kammer M., Zagrai L., Scorza R., 2008b- Blompekoppevirus-dæmpning af C5-transgene blommer er stabil under udfordringsinokulation med heterologe vira. Tidsskrift for Plantepatologi, 90:63-71.

Zagrai I., Zagrai L., Ravelonandro M., Gaboræer I., Pamphil D., Ferencz B., Popescu O., Scorza R., Capote, N. 2008C. Miljøkonsekvensvurdering af transgene blommer på mangfoldigheden af ​​blommepokkeviruspopulationer. Tidsskrift for Havebrug 781: 309-318.

Yderligere referencer

Atanassov D., 1932. Blommekopper. En ny virussygdom. Ann Univ. Sofia Fakultet Ag. Skov. 11: 49-69.

Kammer M., Hætte N., Myrta A., Lácer G., 2006. Blommekoppevirus og estimerede omkostninger forbundet med hajsygdom. Bulletin OEPP/EPPO Bulletin 36:202-204.

Hætte N., Kammer M., Lácer G., Petter F., Platts L.G., Roy A.S., Smith I.M., 2006. En anmeldelse af Plum pox virus/A review of Plum pox virus. I: Tyr. EPPO/EPPO Bull. 36 (2) : 201-349.

Hætte N., Perez-Panades J., Monzo C., Carbonell E., Urbaneja A., Scorza R., Ravelonandro M., Kammer M., 2008. Vurdering af mangfoldigheden og dynamikken af ​​blommekoppervirus og bladluspopulationer i transgene europæiske blommer under middelhavsforhold. Transgen forskning 17:367-377

Fuchs M., Kammer M., Hætte N., Jelkmann W., Kundu J., Laval V., Martelli G.P., Minafra A., Petrovic N., Pfieffer P., Pompe-Nocak M., Ravelonandro M., Sldarelli P., Stussi-Garaud C., Vigne E., Zagrai I., 2007. Sikkerhedsvurdering af transgene blommer og vinstokke, der udtrykker virale pelsproteingener: ny indsigt i reel miljøpåvirkning af flerårige planter, der er udviklet til virusresistens. Tidsskrift for Plantepatologi 89: 5-12.

Malinowski T., Kammer M., Hætte N., Zawadzka B., Gorris M.T., Scorza R., Ravelonandro M., 2006. Feltforsøg med blommekloner transformeret med Plum pox virus kappeproteinet (PPV-CP) gen. Plantesygdom 90:1012-1018.

Ravelonandro M., Scorza R., Bachelor J.C., Labonne G., Levy L., Damsteegt V., Callahan A.M., Dunez J., 1997. Resistens af transgene Prunus domestica til blommekoppevirusinfektion. Plantesygdom, 81: 1231-1235

Ravelonandro M., Briard P., Monsion M., Scorza R., 2002. Stabil overførsel af blommekoppevirus (PPV) capsid transgen til frøplanter af to franske kultivarer 'Prunier d'Ente 303' og 'Quetsche 2906', og foreløbige resultater af PPV-udfordringsassays. Acta Hort. 577:91-96.

Scorza R., Ravelonandro M., Callahan A.M., Hjerte J.M., Fuchs M., Dunez J., Gonsalves D., 1994. Transgene blommer (Prunus domestica) udtrykke blommekopper virus kappeproteingen. Plantecelle repts. 14:18-22.

Scorza R., Callahan A., Levy L., Damsteegt V., Webb K., Ravelonandro M., 2001. Post-transkriptionel gendæmpning i blommekopper virus resistent transgene europæisk blomme indeholdende blommekopper potyvirus kappeproteingen. Transgen forskning 10: 201-209.

Scorza R., Callahan A., Levy L., Damsteegt V., Ravelonandro M., 1998. Overførsel af potyviruskappeproteingener gennem hybridisering af transgene planter for at producere blommekoppervirusresistente blommer (Prunus domestica L.). Tidsskrift for Havebrug 472:421-425.

Principal Investigator

Zagrai I., Forsknings-udviklingsstationen for Bistrita frugtkultur, Avls- og virologisk laboratorium., Drumul Dumitrei Nou gaden, ingen 3, Bistrica, Rumænien. E-mail: izagrai@yahoo.com